BECKMAN 125型高效液相色譜儀使用的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）

1. 適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)適用于BECKMAN 125型高效液相色譜儀的使用操作。
2. 目的與意義
規(guī)范BECKMAN 125型高效液相色譜儀的使用操作，保證高效液相測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3. 責(zé)任
質(zhì)量分析人員全面負(fù)責(zé)本SOP的實(shí)施。
4. 儀器的組成
本系統(tǒng)由SYSTEM GOLD? 125溶劑輸送泵、SYSTEM GOLD? 166檢測(cè)器(190～360 nm)、Rheodyne 7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、HT-330 柱溫箱、BECKMAN色譜工作站、打印機(jī)等組成。
5. 操作步驟
5.1. 準(zhǔn)備
5.1.1準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。
5.1.2根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（注意方向）。
5.1.3配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液，用合適的0.20μm濾膜過濾。
5.2. 開機(jī)
接通電源，依次開啟泵、檢測(cè)器開關(guān)，打開計(jì)算機(jī)進(jìn)入win2000操作系統(tǒng)，雙擊桌面的32 Karat圖標(biāo)進(jìn)入主菜單對(duì)話框，雙擊Instrument圖標(biāo)進(jìn)入色譜分析界面（包括Direct Control、Det166、Instrument Setup等界面）。
5.3. 創(chuàng)建分析方法
可在Direct Control界面直接點(diǎn)擊各設(shè)備單元的圖像進(jìn)行流動(dòng)相比例、流速、最大壓力限、最小壓力限、檢測(cè)波長以及檢測(cè)器開啟與關(guān)閉等參數(shù)的設(shè)定，亦可點(diǎn)擊 “Methed/Instrument Setup” 進(jìn)行相應(yīng)的設(shè)定，然后點(diǎn)擊 “File/Methed/Save As”保存設(shè)定的方法。
5.4. 更換流動(dòng)相并排氣泡
將管路的吸濾器放入裝有流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中，逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)排液閥90-180°，打開排液閥；設(shè)流速為5ml/min，沖洗3min后設(shè)流速為0停泵，將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。如管路中沒有氣泡，則排氣泡操作可省略；如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。
5.5. 平衡系統(tǒng)
用流動(dòng)相沖洗至基線漂移<0.001AU/min，噪聲為<0.0005 AU時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。
5.6. 輸入樣品信息
點(diǎn)擊“Control/Single Run”，在Sanple ID（樣品名稱）、Method（方法）、Data path（保存路徑）、Data file（文件名）輸入相應(yīng)的信心，然后點(diǎn)擊Submit提交。
5.7. 進(jìn)樣
在“Direct Control”界面點(diǎn)擊AutoZero鍵調(diào)零；用進(jìn)樣針定量吸取樣品溶液，在進(jìn)樣閥處于INJECT狀態(tài)下插入進(jìn)樣針；逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)樣閥手柄，在LOAD狀態(tài)下推針進(jìn)樣，再順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)樣閥手柄使其回至INJECT狀態(tài)即完成進(jìn)樣操作5.8. 報(bào)告輸出與打印
在主菜單對(duì)話框內(nèi)右擊Instrument圖標(biāo)，點(diǎn)擊“open offline”進(jìn)入離線分析界面。
5.8.1系統(tǒng)默認(rèn)報(bào)告格式：點(diǎn)擊“File/Data/New”打開相應(yīng)文件后，點(diǎn)擊“Report/View/Area%”。
5.8.2自定義報(bào)告格式：點(diǎn)擊“File/Data/New”打開相應(yīng)文件后，在該界面中單擊鼠標(biāo)右鍵，點(diǎn)擊“Graphical programming/Define Peaks”，在色譜圖中單擊自定義峰的起始和終點(diǎn)位置，點(diǎn)擊“File/Method/Save”進(jìn)行方法保存；點(diǎn)擊“Report/Analyze”，進(jìn)行自定義報(bào)告的分析；點(diǎn)擊“Method/Custom Report”，在彈出的界面中分別點(diǎn)擊“Insert field”、“Insert Graph/Data Graph”和“Insert Report/Run Report”即可分別插入常規(guī)信息、圖譜、數(shù)據(jù)，從而完成自定義報(bào)告。
完成報(bào)告輸出后，點(diǎn)擊“Report/Print/Area%”或者“Report/Print/ Custom Report”即可打印報(bào)告。
5.9 關(guān)機(jī)
5.9.1 測(cè)定完畢后，在Direct Control界面點(diǎn)擊檢測(cè)器圖標(biāo)關(guān)閉紫外燈。
5.9.2色譜柱的沖洗
5.9.2.1反相柱（C8、C18）：流動(dòng)相含鹽的（可將加酸、加三乙胺等情況并入），以乙腈－水（5：95）（乙腈可用甲醇代替，下同）沖洗30min（可視具體情況增加沖洗時(shí)間，下同），然后以乙腈沖洗20 min以上；流動(dòng)相不含鹽的，以流動(dòng)相沖洗10 min以上，然后以甲醇沖洗20 min以上；流動(dòng)相添加離子試劑的，以乙腈－水（5：95）沖洗45 min以上，然后以乙腈沖洗20 min以上。流速一般設(shè)為1ml/min。
5.9.2.2正相柱：流動(dòng)相含鹽的，以不含鹽流動(dòng)相沖洗30 min以上，再以正己烷沖洗20 min以上（如流動(dòng)相極性與正己烷有較大差異，可在流動(dòng)相沖洗后，以異丙醇低速?zèng)_洗進(jìn)行過渡，注意以異丙醇為流動(dòng)相流速不得超過0.5ml/min，下同）；流動(dòng)相不含鹽的，以流動(dòng)相沖洗20 min以上，再以正己烷沖洗20 min以上。
5.9.3 停泵，逐級(jí)關(guān)閉工作站窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)及儀器各部件電源開關(guān)。
5.10 填寫儀器使用記錄
6.注意事項(xiàng)
6.1 流動(dòng)相及樣品溶液必須用0.45um濾膜過濾，流動(dòng)相還要進(jìn)行脫氣處理。
6.2進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20μl的定量環(huán)最少進(jìn)樣60至100μl的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進(jìn)樣針配合20ul滿環(huán)進(jìn)樣。
6.3 待泵的壓力穩(wěn)定后，方可開啟檢測(cè)器。
6.4 試驗(yàn)結(jié)束后，待泵的壓力逐步降為0后，方可關(guān)閉泵的電源。
6.5 仔細(xì)閱讀色譜柱說明書，保證色譜柱系統(tǒng)的適應(yīng)性（流動(dòng)相pH 2-8；柱壓小于2.5 KPSI）。