基因槍的使用操作規(guī)程

1。材料準備 在9cm2培養(yǎng)皿上鋪一薄層培養(yǎng)基，把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈傷組織、懸浮細胞、原生質體等)平鋪于培養(yǎng)皿中心，直徑在3cm范圍內。2．金粉的處理取60mg金粉或鎢粉置于離心管中，加入lml無水乙醇，充分振蕩3min，以9615g離心1rain，去上清，再加入...關鍵詞：方法操作基因乙醇離心固定
1。材料準備
在9cm2培養(yǎng)皿上鋪一薄層培養(yǎng)基，把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈傷組織、懸浮細胞、原生質體等)平鋪于培養(yǎng)皿中心，直徑在3cm范圍內。
 
2．金粉的處理
取60mg金粉或鎢粉置于離心管中，加入lml無水乙醇，充分振蕩3min，以9615g離心1rain，去上清，再加入lml無菌水充分混勻后，以9615g離心，重復上述步驟3次。最后，將金粉懸浮于lml無菌蒸餾水中，置4‘C或室溫下儲存。
 
3．DNA的處理
取50tA金粉懸浮液，依次加入5rd的質粒DNA(1．0／lg～1)溶液、50／／l 0．1mol／L亞精胺(所用的溶液經(jīng)無菌消毒)，振蕩3rain后，在室溫下放置10min，以9615g離心10s，棄去上清液；加入250~1無水乙醇，振蕩后以9615g離心10s，棄上清液。沉淀重新懸浮于60／1l無水乙醇中，可供5槍(每槍10~1)使用。
 
4．基因槍的操作
基因槍的所有操作均在無菌條件下進行，具體步驟如下：
1)先用70％乙醇對基因槍表面及樣品室進行消毒。同時，用70％乙醇將阻擋網(wǎng)和可裂圓片，微彈載體及其固定器、固定工具浸泡15min后，放在超凈臺上晾干?？闪涯て?、固定蓋、微彈載體發(fā)射裝置可用70％乙醇進行表面滅菌，吹干。
2)將微粒載片嵌入固定環(huán)中，取DNA及金粉的混合物加于微粒載片中心，干燥lmin左右。
3)安裝可裂膜于其托座上，順時針擰到氣體加速器上。
4)將空間環(huán)、阻擋網(wǎng)、阻擋網(wǎng)托座、微粒載片及固定環(huán)(帶有微粒的面朝下)安裝好，旋緊蓋子，插入搶中。
5)把樣品放在轟擊室中，關好門。
6)打開氦氣瓶的總閥，順時針轉氦氣調節(jié)閥，使氦壓表指針的示數(shù)高于可裂膜壓力200i(＝1．379MPa)。
7)打開基因槍及變壓器開關。
8)按動真空鍵，待真空度至26—28in Hg(＝88．05～94．82kPa)時，迅速按下Hold鍵，接著按住發(fā)射鍵，并保持不動，直到激發(fā)為止。
9)按通氣鍵待真空表歸零后，取出樣品。
10)關機。
把氦氣瓶的總開關旋緊，打一次空槍，把氦壓表指針歸零后，再逆時針旋轉氦壓表調節(jié)閥；關閉基因槍的總開關及變壓器開關。